如果固定相選擇是正確，但是分離度不夠，那么選用更小粒度的ODS填料是很有用的。3umODS填料填充柱的柱效比相同條件下的5pmODS填料的柱效提高近30%;然而，3um的色譜柱的背壓卻是5um的2倍。與此同時，柱效提高意味著在相同條件下可以選用更短的色譜柱，即相同的塔板數(shù)或分離能力，但是柱長更短，以縮短分析時間。另外，可以采用低粘度的溶劑做流動相或增加色譜柱的使用溫度，比如用乙睛代替甲醇，以降低色譜柱的壓力。

　　ODS填料操作注意要點(diǎn)及注意事項(xiàng)

　　1).首先對流動相進(jìn)行過濾，根據(jù)需要選擇不同的濾膜，一般為有機(jī)系和水系，常用的孔徑為0.20um和0.45um。

　　2).對抽濾后的流動相進(jìn)行超聲脫氣10-20分鐘。

　　3).正常情況下，儀器首先用甲醇沖洗10-20分鐘，然后再進(jìn)入測試用流動相(如流動相為緩沖試劑，則要二次重蒸水沖洗10-20分鐘，直至色譜柱中有機(jī)相沖凈為止)。

　　4).一般情況下，流動相沖洗20-30分鐘后，儀器方可穩(wěn)定，重要的是儀器基線走后，方可進(jìn)樣測試。

　　5).同時進(jìn)兩針標(biāo)樣，將其結(jié)果相比較，其結(jié)果的比值在0.98-1.02之間后，就可以正式進(jìn)行樣品的測試了。

　　6).樣品測試結(jié)束后，就要進(jìn)行色譜儀及色譜柱的清洗和維護(hù)。如流動相為緩沖試劑，同樣也要用重蒸水清洗10-20分鐘，方可用有機(jī)相進(jìn)行保護(hù)，否則，有損色譜柱。

　　7).關(guān)機(jī)時，先關(guān)計算機(jī)，再關(guān)液相色譜。

　　8).填寫登記本，由負(fù)責(zé)人簽字。

　　注意事項(xiàng)

　　1).流動相均需色譜純度，水用20M的去離子水。脫氣后的流動相要小心振動盡量不引起氣泡。

　　2).柱子是非常脆弱的，次做的方法，先不要讓液體過柱子。

　　3).所有過柱子的液體均需嚴(yán)格的過濾。

　　4).壓力不能太大，不要超過150kgf/cm2.

　　5).因?yàn)榫彌_試劑遇有機(jī)溶劑，會結(jié)晶，有損色譜柱，所以，每次由有機(jī)相變流動相或流動相變有機(jī)相均需用蒸餾水清洗。